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分析酶标仪的免疫吸附试验原理

酶标仪是我们生活中应用的非常广泛的医疗设备,下面就酶标仪的免疫吸附试验的基本原理讲解一下:
(一)先将过量的特异抗体(或抗原)包被于载体(酶标板)上,通过抗原抗体反应使待侧物质(抗原或抗体)和酶标记物(用HRP-辣根过氧化物酶标记的抗体或抗原)也结合在载体上(固相分离),经洗涤去除游离的酶标记物后,加入底物,已经结合在载体上的标记酶促使底物显色。蕞终利用光电比色法,对待测物进行定性判断或定量测定。以上方法的检验灵敏度可以达到ng/ml水平。
(二)包被酶标板:将特异抗原溶液加入酶标板孔内,4℃过夜。然后用洗涤液洗涤3次到5次(洗板机洗板),这样溶液中的特异抗原被牢固吸附在酶标板的微孔表面,形成固相抗原,残液及杂质被清洗掉。
(三)加入被测样本液(病人血清):样本液中若含有待测抗体,经过温育反应,则与已包被的抗原产生特异结合,生成包被抗原与待测抗体的复合物,被吸附在酶标板的微孔表面。然后再次进行洗涤,去除残液及干扰物质。
(四)加酶结合物:经过温育反应,生成包被抗原加待测抗体加酶标抗原的三者复合物,同样被吸附在微孔表面,然后再次洗涤,去除游离的或非特异沾附的酶结合物(洗板)。
(五)加显色液:经过10分钟到20分钟的显色反应,被吸附的复合物中的酶与显色底物液生成有色溶液。此时,由于游离或非特异吸附的酶已被清除,所以溶液颜色的深浅,仅决定于已与待测物结合的酶的量,因此能真实反映待测物的浓度。被固化的酶越多,显色就会越深,这就说明待测物的浓度越大。
(六)加终止液:终止显色反应。
使用酶标仪检验:把完成显色的酶标板放在酶标仪仪器上进行光电比色检验,仪器分别检测空白孔、阴阳性对照孔、标准孔、质控孔和患者样本孔的吸光度值,并自动按程序要求计算出患者样本中待测物的浓度或进行定性分析。
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